Parámetros hemocitarios y química de la hemolinfa en reproductores de la concha prieta Anadara tuberculosa (Arcoida: Arcidae)

Con motivo de conocer el estado de salud de poblaciones silvestres de la concha prieta Anadara tuberculosa se estudiaron los parámetros hemocitarios (viabilidad, conteo total y diferencial, estabilidad lisosomal, fragilidad osmótica) y la química sanguínea (hemoglobina-Hb, proteínas, triglicéridos, glucosa, lactato deshidrogenasa-LDH y catalasa-CAT). Se extrajo hemolinfa en reproductores salvajes aparentemente sanos colectados en la isla Corazón, río Chone, Ecuador. La viabilidad celular fue elevada, con presencia de 5 morfotipos: eritrocitos (74%), granulocitos traslucidos (6%), amebocitos (3%), hialinocitos (12%), blastocitos (5%). Los hemocitos presentaron membranas lisosomales estables al rojo neutro durante 240 min y una fragilidad osmótica media (FO50) de 4.8‰. Las concentraciones de Hb, proteínas, lípidos y glucosa denotan la función respiratoria y reservas energéticas durante los cambios de marea. La actividad de LDH está vinculada al metabolismo anaeróbico y CAT a la capacidad de mantener el equilibrio redox del sistema inmunitario. Los parámetros hemocitarios y química de la hemolinfa pueden servir como índices fisiológicos normales de referencia en reproductores de A. tuberculosa.

In this work we studied the health status of wild populations of the black shell Anadara tuberculosa, haemocyte parameters (viability, total and differential count, lysosomal stability, osmotic fragility) and blood chemistry (haemoglobin-Hb, proteins, triglycerides, glucose, lactate dehydrogenase-LDH and catalase-CAT). Haemolymph was extracted from apparently healthy wild broodstock collected from Corazón Island, Chone River, Ecuador. Cell viability was high, with 5 morphotypes present: erythrocytes (74%), colorless granulocytes (6%), amebocytes (3%), hyalinocytes (12%), blastocytes (5%). Haemocytes showed stable lysosomal membranes to neutral red for 240 min and a mean osmotic fragility (OF50) was 4.8‰. Hb, protein, lipid and glucose concentrations denote respiratory function and energy reserves during tidal changes. LDH activity is linked to anaerobic metabolism and CAT denotes the ability to maintain the redox balance of the immune system. The haemocitary parameters and haemolymph chemistry can serve as normal physiological reference indices in A. tuberculosa broodstock.

Estudio de componentes hemolinfáticos de Rhodnius prolixus y Triatoma maculata alimentados con diferentes fuentes sanguíneas / Study of hemolymphatic components of Rhodnius prolixus and Triatoma maculata fed on different blood sources

RESUMEN Introducción: Tradicionalmente, Rhodnius prolixus ha sido considerado el principal vector, mientras que Triatoma maculata resulta ser un vector secundario de Trypanosoma cruzi en el medio rural venezolano. En este trabajo se provee información de interés acerca de los componentes bioquímicos y del sistema inmune, humoral y celular, de la hemolinfa de R. prolixus y T. maculata alimentados sobre gallina y rata. Metodología: los insectos provenían de una colonia del laboratorio, mantenida a una temperatura de 27-29ºC, 50% de humedad relativa y ocho horas luz/día. Se analizó la hemolinfa de adultos alimentados sobre gallina y rata. Se observaron los hemocitos mediante microscopía óptica y electrónica de transmisión. Resultados: los parámetros bioquímicos de glucosa, lípidos y proteínas fueron afectados de forma distinta en R. prolixus y T. maculata según la fuente alimenticia. T. maculata presentó mayores niveles de actividad lítica de lisozima. Se observaron cuatro poblaciones de hemocitos (prohemocitos, plasmatocitos, granulocitos y oenocitos), cuyas características y medidas están acorde a lo reportado por otros autores sobre la subfamilia Triatominae. T. maculata presentó mayor número de prohemocitos y oenocitos que R. prolixus. Conclusiones: En su hemolinfa, R. prolixus y T. maculata son afectados distintamente en los componentes bioquímicos (glucosa, lípidos y proteínas) e inmunes, tanto humorales (lizosima) como celulares (prohemocitos, oenocitos), según sean alimentados sobre gallina y rata. Esto pone de manifiesto de la alimentación sobre uno de los componentes de la competencia vectorial, como lo es el sistema inmune propio de la hemolinfa de los insectos.

ABSTRACT Introduction: Traditionally, Rhodnius prolixus has been considered the main vector, while Triatoma maculata remains to be a secondary vector of Trypanosoma cruzi in the Venezuelan rural habitat. In this work, interesting information about the biochemical and immune (humoral and cellular) aspects of the hemolymph of R. prolixus and T. maculate, feeding on hen and rat, are presented. Methodology: Hemolymph was extracted from adult insects, maintained at 2729 °C with 50% of relative humidity and 8/16 (Light/Dark) hours, and fed on hen and rat. Hemocytes were observed by optical and transmission electron microscopy. Results: Biochemical parameters (glucose, lipids and proteins) varied in both species according to the food source. T. maculata presented higher levels of lysozyme lytic activity. Four hemocytes populations were observed by optical and transmission electron microscopy (prohemocytes, plasmocytes, granulocytes and oenocytes), exhibiting characteristics and measurements in accordance with previous literature related to the Triatominae subfamily. T maculata presented more prohemocytes and oenocytes than R. prolixus. Conclusions: On their hemolymph, R. prolixus and T. maculata are distinctly affected in their biochemical (glucose, lipids and proteins) and immune components, both humoral (lysozyme) and cellular (prohemocytes, oenocytes), depending on whether they were fed on hens or rats. Our results show that the food source affects the immune system of triatomines, and subsequently, their vectorial capacity may be compromised as well.

Perfil proteico da hemolinfa de Biomphalaria glabrata e linhagens de B. straminea, frente à exposição ao Schistosoma mansoni / Protein profile of hemolymph of Biomphalaria glabrata and strains of B. straminea, against the exposure to the Schistosoma mansoni

O gênero Biomphalaria possui espécies de grande relevância médica uma vez que atuam como hospedeiros intermediários naturais do parasita Schistosoma mansoni, causador da esquistossomose. Dentro desse gênero de moluscos, três espécies são tidas como hospedeiros naturais do parasita, Biomphalaria glabrata, B. straminea e B. tenagophila. O perfil de suscetibilidade à infecção por S. mansoni dentro do gênero é muito variado e muitas pesquisas buscam elucidar a dinâmica da relação parasita-hospedeiro intermediário na finalidade de criar novas medidas de controle da doença. Por isso, esse estudo tem como objetivo determinar o perfil bidimensional de proteínas que podem estar envolvidas na resposta imune contra o S. mansoni comparando duas espécies com diferentes perfis de susceptibilidade B. glabrata, B. straminea além de uma refratária ao S. mansoni, a B. straminea R3. Para isso, os caramujos de cada espécie foram divididos em dois grupos: Infectado, expostos aos miracídios do S. mansoni; e Controle, submetidos ao estresse do processo de infecção livre de miracídios. A hemolinfa foi retirada 24 horas após a exposição. Foi feito o extrato proteico total e determinada a concentração das proteínas totais para cada grupo investigado. As proteínas foram separadas por eletroforese bidimensional onde foi obtido o ponto isoelétrico e peso molecular de todos os spots nos géis...

The Biomphalaria has species of great medical relevance since that act as natural intermediate hosts of the parasite Schistosoma mansoni, which causes schistosomiasis. Within this kind of mollusks, three species are considered natural hosts of the parasite, Biomphalaria glabrata, B. stramineaand B. tenagophila. The profile of usceptibility to S. mansoni infection within the genre is very varied and many studies seek to elucidate the dynamics of host-parasite relationship intermediary in order to create new disease control easures. Therefore, this study aims to determine the two-dimensional profile of proteins that may be involved in the immune response against S. mansonicomparing two species with different susceptibility profiles B. glabrata, B. straminea and a refractory to S. mansoni, B. straminea R3. For that, the snails of each species were divided into two groups: Infected exposed to iracidia of S. mansoni; and control, subjected to stress the miracidia free infection process. The hemolymph was removed 24 hours after exposure. It was made the total protein extract and determined the concentration of total protein for each group investigated. Proteins were separated by two-dimensional electrophoresis was obtained where the isoelectric point and molecular weight of all the spots in the gels...

Evaluación de la actividad antibacterial de los extractos de cuerpos grasos y hemolinfa derivados de la mosca Sarconesiopsis magellanica (Diptera: Calliphoridae) / Assessment of antibacterial activity by fat bodies extracts and hemolymph derived from the blowfly Sarconesiopsis magellanica (Diptera: Calliphoridae)

Objetivo: Evaluar, en condiciones in vitro , la actividad antibacterial de los extractos de cuerpos grasos y de la hemolinfa de larvas de tercer estadio de Sarconesiopsis magellanica , la cual se comparó con los efectos obtenidos de las mismas sustancias derivadas de Lucilia sericata . S. magellanica (Diptera: Calliphoridae) es una mosca de importancia principalmente forense, utilizada en la determinación del intervalo post mortem . Por sus hábitos necrófagos, es considerada un modelo potencialmente útil en terapia larval. Material y métodos: Se extrajeron los cuerpos grasos de las larvas mediante la técnica de disección corporal y la hemolinfa se obtuvo mediante decapitación y centrifugación de los especímenes larvales. Las bacterias evaluadas fueron Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa . Los métodos utilizados para evaluar la actividad antibacterial fueron difusión en agar y unidades formadoras de colonias (UFC/ml). Resultados: Después de la correspondiente incubación, los resultados generales mostraron que la actividad antibacterial de la hemolinfa y de los cuerpos grasos, tanto de L. sericata como de S. magellanica , fueron efectivos contra S. aureus y P. aeruginosa sin diferencias significativas entre las especies de moscas, aunque con algunas diferencias entre las cepas bacterianas. Conclusiones: Los resultados obtenidos sugieren que estas sustancias podrían tener un efecto similar en el tratamiento de heridas infectadas contra los microorganismos evaluados.

Objective: This study aimed to evaluate the in vitro antibacterial activity of fat body and hemolymph extracts from Sarconesiopsis magellanica (Diptera: Calliphoridae) third-instar larvae, compared to the effect obtained using the same extracts but derived from Lucilia sericata . S. magellanica blowflies are considered important in forensic sciences due to their usefulness in determining the post mortem interval. This blowfly could be useful in larval therapy due to its necrophagous habits. Materials and methods: Fat body from larvae was removed by dissection, and hemolymph via decapitation and centrifugation of larval specimens. The antibacterial effect was tested against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa using two methods: agar diffusion and colony forming units (CFU/mL). Results: Hemolymph and fat body extracts derived from both L. sericata and S. magellanica were effective against S. aureus and P. aeruginosa , with no significant differences between blowfly species, although with some differences between the bacterial strains. Conclusions: The results obtained suggest that S. magellanica and L. sericata fat body and hemolymph extracts might have a similar antimicrobial activity against these microorganisms when used to treat infected wounds.

Ovary histology and quantification of hemolymph proteins of Rhipicephalus (Boophilus) microplus treated with Melia azedarach / Histologia do ovário e quantificação de proteínas na hemolinfa de Rhipicephalus (Boophilus) microplus tratado com Melia azedarach

This study aimed to analyze ovary histology and quantify total protein in the hemolymph of Rhipicephalus (Boophilus) microplus females treated with hexane extracts from green fruits of Melia azedarach. Eight engorged females were immersed in the extract at 0.25% concentration, and eight in water containing 5% acetone (control). The females were dissected 72 hours after treatment, and the ovaries were weighed and subjected to standard histological techniques. The total protein concentration was measured in the hemolymph of 200 females, of which 100 were treated as described above and 100 served as a control. In the treated group, ovary weight reduction and predominance of immature oocytes were observed. In addition, there were decreases in the diameters of the cytoplasm and germ vesicle of the oocytes in the treated group, compared with the controls. The protein concentration in the hemolymph was higher in the treated group than in the controls. The morphological changes observed in the treated ovaries included: presence of vacuolization; alteration of oocyte morphology, which changed from rounded to elongated; deformation of the chorion; and disorganization of the yolk granules. These results demonstrate the action of M. azedarach fruit extracts on R. (B.) microplus oogenesis.

Este estudo foi desenvolvido, visando analisar a histologia do ovário e quantificar as proteínas totais na hemolinfa de fêmeas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus tratadas com extrato hexânico de frutos verdes de Melia azedarach. Oito fêmeas ingurgitadas foram tratadas por imersão com o extrato na concentração de 0,25%, e oito com água contendo 5% de acetona (controle). As fêmeas foram dissecadas 72 horas após o tratamento e os ovários foram pesados e submetidos a técnicas histológicas padrões. A concentração total de proteína foi mensurada na hemolinfa de 200 fêmeas, sendo 100 tratadas como descrito anteriormente e 100 como controle. Foi observada redução do peso dos ovários, predomínio de ovócitos imaturos e houve diminuição nos diâmetros do citoplasma e da vesícula germinal dos ovócitos do grupo tratado em comparação ao controle. A concentração de proteína na hemolinfa foi mais alta no grupo tratado que no controle. As alterações morfológicas observadas nos ovários tratados foram a presença de vacuolizações, alteração da morfologia dos ovócitos que mudaram de redondos para alongados, deformação do córion e desorganização dos grânulos de vitelo. Estes resultados demonstram a ação do extrato de M. azedarach na ovogênese de R. (B.) microplus.

Tripanosomatides like Trypanosoma theileri in the cattle tick Boophilus microplus / Tripanosomatídeos similares a Trypanosoma theileri no carrapato dos bovinos Boophilus microplus

Findings of epimastigotes forms of a tripanosomatide is reported in the hemolymph of the cattle tick Boophilus microplus in the state of Rio Grande do Sul, southern Brazil. Morphological evidences suggest they are similar to Trypanosoma theileri, a species described as non pathogenic to cattle, and usually transmitted by tabanids.

Descreve-se a ocorrência de formas epimastigotas de um tripanosomatideo na hemolinfa do carrapato do bovino Boophilus microplus no Estado do Rio Grande do Sul. Evidências morfológicas sugerem tratar-se de Trypanosoma theileri , espécie descrita como não patogênica aos bovinos e que usualmente é transmitida por tabanídeos.

Ocorrência de Borrelia spp. em cultura de células embrionárias do carrapato Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) no Estado do Mato Grosso do Sul, Brasil / Occurrence of Borrelia spp. in culture of embryonic cells of the tick Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) in the State of the Mato Grosso do Sul, Brazil

O presente trabalho teve como objetivo reportar a ocorrência de Borrelia spp. em culturas de células embrionárias de Boophilus microplus infectados naturalmente. Sete dias após o início de uma nova cultura primária de células embrionárias do carrapato B. microplus, incubadas a 31ºC, notou-se que as células começaram a degenerar. Ao exame em microscópio de contraste de fase detectou-se a presença de microrganismos alongado e com grande mobilidade. Lâminas de microscópio confeccionadas com amostras do sobrenadante da cultura, hemolinfa e massa de ovos, coradas pelo May Grünwald-Giemsa, permitiram a visualização de espiroquetas. O exame morfológico do microrganismo e sua visualização em B. microplus sugere ser Borrelia spp.

The aim of the present work was to report the occurrence of Borrelia spp. in embryonic cell cultures from naturally infected Boophilus microplus. Seven days after the beginning of a primary culture of embryonic cells of B. microplus at 31ºC was noted that the cells start suffering degeneration. Under examination at phase contrast microscope, the presence of prolongated microorganisms with great mobility was detected. Microscopic slides of the culture supernatant, hemolymph and egg mass, were stained by May Grünwald-Giemsa, allowing the visualization of the spirochetes. The morphologic examination of the microorganism and its visualization in. B. microplus, suggest to be Borrelia spp.

Activation of Prophenoloxidase and Removal of Bacillus subtilis from the Hemolymph of Acheta domesticus (L. ) (Orthoptera: Gryllidae) / Ativação da Profenoloxidase e Remoção de Bacillus subtilis da Hemolinfa de Acheta domesticus (L. ) (Orthoptera: Gryllidae)

Fenoloxidase é considerada um importante mediador no sistema de defesa dos insetos contra patógenos e parasitóides. Essa enzima está presente na hemolinfa da maioria dos insetos estudados como uma proenzima inativa chamada profenoloxidase. Em Acheta domesticus (L.) a atividade da enzima foi estudada na presença de Bacillus subtilis. Injeções de bactéria na hemocele de ninfas desse inseto elevaram o nível de atividade da phenoloxidase. A taxa de aumento foi semelhante à observada nos insetos injetados com laminarin, um ativador da proenzima. A incubação de células de B. subtilis em soro com fenoloxidase ativada in vitro, e posterior injeção nos insetos, acelerou a remoção das bactérias da hemolinfa. A concentração das bactérias foi menor do que a observada nas ninfas injetadas apenas com bactéria em solução tampão. Por outro lado, ninfas injetadas com suspensão de bactéria incubada em soro com fenoloxidase inativada in vitro apresentaram alta concentração de bactéria na hemolinfa. Esses resultados indicam que B. subtilis é sensível à cascata de profenoloxidase de A. domesticus. Sugere-se que a fenoloxidase ativada adere à superfície das bactérias e aumenta a fixação dos hemócitos em torno das bactérias. Isso contribui para acelerar sua remoção da hemolinfa através da formação de nódulos.

Insect phenoloxidase is considered an important mediator in defense reaction against pathogens and parasites. It is present in the hemolymph of most insects as an inactive proenzyme, called prophenoloxidase. In Acheta domesticus (L.) the phenoloxidase activity was studied in the presence of Bacillus subtilis. The bacteria induced the activation of the prophenoloxidase and increased the level of phenoloxidase activity when injected into the hemocoel of A. domesticus nymphs. The level of increase was comparable to those observed in nymphs injected with laminarin, an activator of the proenzyme. Incubating B. subtilis in serum with phenoloxidase activated in vitro and then injecting into the insects accelerated the removal of the bacteria from the hemolymph in vivo. The concentration of bacteria was lower than those observed in nymphs injected with Mes buffer alone. In control insects, injection of soybean trypsin inhibitor lowered phenoloxidase activity and the removal of bacteria from the hemolymph. These results indicate that B. subtilis is sensitive to the prophenoloxidase cascade of A. domesticus. It is suggested that activated phenoloxidase could bind to the surface of bacteria and increase the adhesion of hemocytes to bacteria, and thus accelerating their removal by nodule formation.